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Comparaci�n entre las t�cnicas de sedimentaci�n, flotaci�n y coproparasitario seriado para el diagn�stico de Geohelmintiasis Intestinal

 

Comparison between sedimentation, flotation and serial coproparasitic techniques for the diagnosis of intestinal soil-transmitted helminthiasis

 

Compara��o entre t�cnicas de sedimenta��o, flota��o e coproparasit�ria seriada para diagn�stico de Geohelmint�ase Intestinal

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Correspondencia: wvega6680@uta.edu.ec

 

Ciencias de la Salud

Art�culo de Investigaci�n

 

 

* Recibido: 15 de mayo de 2024 *Aceptado: 12 de junio de 2024 * Publicado: �30 de julio de 2024

 

        I.            Universidad T�cnica de Ambato, Facultad Ciencias de la Salud, Carrera de Laboratorio Cl�nico, Ambato, Ecuador.

      II.            Universidad T�cnica de Ambato, Facultad Ciencias de la Salud, Carrera de Laboratorio Cl�nico, Ambato, Ecuador.

Resumen

La Geohelmintiasis Intestinal es una enfermedad parasitaria causada por helmintos que requieren el contacto con el suelo para poder hospedar al individuo, este tipo de afecci�n presenta mayor incidencia en pa�ses en v�as de desarrollo donde existen h�bitos inadecuados de saneamiento y zonas geogr�ficas que ayudan al proceso de infecci�n. Adem�s, las infecciones intestinales provocadas por par�sitos son un grave problema de salud a nivel mundial, por ende, es necesario el diagn�stico temprano y oportuno de este tipo de patolog�as. Sin embargo, las t�cnicas coprol�gicas usadas en el laboratorio cl�nico son ineficiente en algunos casos, por ello, recomiendan implementar t�cnicas de sedimentaci�n o flotaci�n, ya que aumentan la sensibilidad y especificidad diagnostica para los diferentes tipos de parasitosis. El objetivo de esta investigaci�n es comparar las diferentes t�cnicas de sedimentaci�n, flotaci�n y coproparasitario seriado para el diagn�stico de Geohelmintiasis Intestinal. Mediante la investigaci�n realizada en las diferentes bases de datos relacionados con el tema de inter�s, se concluye que la t�cnica Baermann y Kato cualitativo, ayudan a identificar Geohelmintos, por la especificidad y procedimiento de la t�cnica, no obstante, las dem�s t�cnicas son �tiles para otros g�neros de par�sitos o la misma pero menos especifica.�

Palabras clave: Geohelmintiasis; sedimentaci�n; flotaci�n; sensibilidad; especificidad.

 

Abstract

Intestinal Geohelminthiasis is a parasitic disease caused by helminths that require contact with the ground to host the individual. This type of disease has a higher incidence in developing countries where there are inadequate sanitation habits and geographic areas that help the infection process. In addition, intestinal infections caused by parasites are a serious health problem worldwide, therefore, early and timely diagnosis of this type of pathology is necessary. However, coprological techniques used in the clinical laboratory are inefficient in some cases, therefore, it is recommended to implement sedimentation or flotation techniques, since they increase the diagnostic sensitivity and specificity for the different types of parasitosis. The objective of this research is to compare the different sedimentation, flotation and serial coproparasitic techniques for the diagnosis of Intestinal Geohelminthiasis. Through research carried out in different databases related to the topic of interest, it is concluded that the Baermann and Kato qualitative techniques help to identify Geohelminths, due to the specificity and procedure of the technique; however, the other techniques are useful for other types of parasites or the same but less specific.

Keywords: Geohelminthiasis; sedimentation; flotation; sensitivity; specificity.

 

Resumo

A geohelmint�ase intestinal � uma doen�a parasit�ria causada por helmintos que necessitam de contacto com o solo para albergar o indiv�duo. Este tipo de condi��o tem maior incid�ncia nos pa�ses em desenvolvimento onde existem h�bitos sanit�rios inadequados e �reas geogr�ficas que auxiliam o processo de infe��o. Al�m disso, as infe��es intestinais causadas por parasitas constituem um grave problema de sa�de em todo o mundo, sendo necess�rio o diagn�stico precoce e atempado deste tipo de patologia. No entanto, as t�cnicas coprol�gicas utilizadas no laborat�rio cl�nico s�o ineficientes em alguns casos, pelo que, se recomenda a implementa��o de t�cnicas de sedimenta��o ou flutua��o, uma vez que aumentam a sensibilidade e especificidade diagn�stica para os diferentes tipos de parasitoses. O objetivo desta investiga��o � comparar as diferentes t�cnicas de sedimenta��o, flota��o e coproparasit�ria seriada para o diagn�stico da Geohelmint�ase Intestinal. Atrav�s da pesquisa realizada nas diferentes bases de dados relativas ao tema de interesse, conclui-se que a t�cnica qualitativa de Baermann e Kato auxilia na identifica��o de Geohelmintos, devido � especificidade e procedimento da t�cnica, no entanto, as restantes t�cnicas s�o �teis para outros tipos de parasitas ou iguais, mas menos espec�ficos.

Palavras-chave: Geohelmint�ase; sedimenta��o; flutua��o; sensibilidade; especificidade.

 

Introducci�n

Las parasitosis intestinales son todas aquellas infecciones producidas por organismos que habitan el aparato digestivo de las personas, por ello, es considerado una problem�tica de salud global situ�ndose entre las diez principales causas de mortalidad, principalmente en pa�ses subdesarrollados (1). Seg�n la Organizaci�n Mundial de la Salud (OMS), ha estimado que aproximadamente 3500 millones de habitantes en el mundo est�n parasitados y 450 millones de personas sufren de enfermedades parasitarias siendo m�s frecuente en ni�os (2).

Seg�n reportes del Ministerio de Salud P�blica en Ecuador, la Parasitosis Intestinal ocupa el segundo lugar entre las causas de morbilidad ambulatoria con un 84.6% de frecuencia en la poblaci�n infantil, ubic�ndose en las diez primeras causas de consulta pedi�trica en los centros de salud (3). Los par�sitos intestinales se clasifican en dos grupos, protozoarios y helmintos. Los protozoarios son organismos unicelulares que poseen vida libre o parasitaria, la principal caracter�stica de este tipo de par�sitos es que pueden multiplicarse dentro del organismo humano (4) .

Por otro lado, los helmintos se consideran organismos multicelulares y se pueden observar a simple vista cuando se encuentran en estadios adultos, sin embargo, se diferencian de los protozoarios porque estos par�sitos se reproducen sexualmente formando huevos f�rtiles, por ello, requieren de tierra para que inicie su fase infectiva (4).

Para el diagn�stico de las diferentes parasitosis ocasionada por los dos grupos mencionados, se utilizan ex�menes de laboratorio como: el an�lisis directo de heces mediante lugol y soluci�n salina o el coproparasitario seriado, por su f�cil preparaci�n y bajo costo, sin embargo, existen otras t�cnicas de uso en heces con mayor eficiencia en cuanto a la clasificaci�n parasitaria, dichas t�cnicas se clasifican en dos grupos, las t�cnicas de sedimentaci�n como: Baermann, Kato cualitativo, Sedimentaci�n espontanea, Faust Ingals y las t�cnicas de flotaci�n como: Willis, Faust y Sheather (5) .

 

Materiales y m�todos

El presente estudio es un art�culo de revisi�n narrativa de la literatura de enfoque documental. Se realiz� un estudio bibliogr�fico donde se recopila, sintetiza y analiza informaci�n enfocada en: comparaci�n de la eficiencia de las t�cnicas de sedimentaci�n, flotaci�n y coproparasitario seriado para el diagn�stico de Geohelmintiasis Intestinal. La investigaci�n cient�fica se realiza en documentos, libros y art�culos originales indexados en bases de datos como Google Acad�mico, PubMed, Elsevier, Scielo y en la biblioteca virtual de la Universidad T�cnica de Ambato (UTA), incluyendo combinaciones con las siguientes palabras claves: Geohelmintiasis/ Sedimentaci�n/ flotaci�n/ especificidad/ sensibilidad.

Criterios de inclusi�n: Los documentos seleccionados son art�culos cient�ficos en idioma ingl�s y espa�ol, publicados desde el a�o 2019. Se hace �nfasis en investigaciones sistem�ticas y originales vinculados al tema de investigaci�n.

Criterios de exclusi�n: Se excluyeron las investigaciones que no est�n disponibles en su estructura completa y aquellas donde los datos son insuficientes.

 

Desarrollo

Los helmintos son organismos invertebrados y se dividen en; nematodos trematodos y cestodos. Es as�, que los gusanos parasitarios trasmitidos por el suelo se denominan geohelmintos en donde Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis, Necator americanus y Ancylostoma duodenale presentan importancia m�dico-sanitaria (6) .

A nivel mundial, los geohelmintos infectan alrededor de 1.500 millones de personas en regiones tropicales y subtropicales, en suelos h�medos, acceso limitado a agua potable, saneamiento e higiene personal inadecuados, falta de acceso a atenci�n m�dica son factores que predisponen al desarrollo de Geohelmintiasis (7) .

En Ecuador el 42.6% de menores de 12 a�os se encuentran infectados por helmintos en donde, Ascaris lumbricoides representa el 27.9% de la poblaci�n parasitada, consider�ndose el helminto con mayor frecuencia en ni�os en edad escolar de las zonas rurales y semirrurales de la regi�n Sierra, Costa y Amazon�a del pa�s, seguido de Ancilostomideos con un 21.3%� (8) .

 

T�cnicas de Flotaci�n

Es una t�cnica utilizada para detectar y concentrar par�sitos en heces, el procedimiento implica realizar una mezcla entre la muestra y una soluci�n hipert�nica cuya densidad es mayor a la de las estructuras parasitarias, por lo cual dichos microorganismos flotan hacia la superficie para su posterior an�lisis microsc�pico (9).

 

T�cnica de Willis

El principio de la t�cnica es flotaci�n simple sin centrifugaci�n, que permite la separaci�n de los microorganismos del exceso de residuos fecales no �tiles para el estudio, mediante el uso de una soluci�n saturada de cloruro de sodio cuya densidad es de 1.200, la t�cnica se emplea para identificar quistes de protozoos y huevos de hymenolepis y uncinarias, los par�sitos poseen un peso menor que la soluci�n por lo cual ascienden hacia la superficie y se adhieren a la laminilla (10) .

El procedimiento consiste en a�adir 1 gramo de heces a 10 ml de la soluci�n en un recipiente, se homogeniza hasta la formaci�n de un menisco de modo que tenga contacto con un cubreobjetos durante un lapso de 10 a 15 minutos, finalmente se coloca en una placa portaobjetos y se realiza un examen directo o con lugol (10) .

 

T�cnica de Faust

Es una t�cnica mixta que combina la flotaci�n y centrifugaci�n, para lo cual se utiliza una soluci�n de sulfato de zinc cuya densidad es 1.180, posee mayor densidad que las estructuras parasitarias por lo cual estas flotan a la superficie y permite la detecci�n de quistes de protozoos, larvas y huevos de par�sitos en muestras fecales a excepci�n de los huevos de Taenias y los no fecundados de Ascaris lumbricoides, sin embargo, es de gran utilidad para los huevos de helmintos comunes porque preserva bien dichas estructuras (11).

En cuanto al procedimiento en primer lugar, se prepara una mezcla homog�nea con la muestra y soluci�n salina isot�nica, se filtra y se procede a centrifugar hasta que el sobrenadante se observe claro. Al terminar se a�ade sulfato de zinc al 33.3% se centrifuga y se coloca dicha soluci�n hasta el borde del tubo, finalmente se debe colocar un cubre objetos encima, reposa por 15 minutos y se observa con lugol (11) .

 

T�cnica de Sheather

Es una t�cnica de concentraci�n por flotaci�n que incluye centrifugaci�n utilizando soluciones saturadas de sacarosa, que permite la separaci�n, concentraci�n y obtenci�n de huevos livianos de helmintos y quistes de protozoarios, espec�ficamente coccidios, es �til para concentrar ooquistes de Cyclospora cayetanesis, Cystoisospora belli, Cryptosporidium spp., las estructuras de los par�sitos poseen menor densidad que la soluci�n de az�car por ende los quistes y huevos flotan (12) .

Para observar bajo el microscopio en primer lugar se debe mezclar materia fecal con suero fisiol�gico, se procede a filtrar y centrifugar, se elimina el sobrenadante y se a�ade la soluci�n saturada de az�car hasta 2 cm por debajo de la parte superior del tubo, se repite el proceso de centrifugaci�n y finalmente se toma la muestra de la superficie y se observa con lugol (12) .

 

T�cnicas de sedimentaci�n

Consiste en el uso de soluciones de menor densidad, es decir, los quistes, ooquistes y huevos parasitarios se depositan en el fondo del tubo por ser m�s densos y los restos fecales no �tiles flotan, es posible acelerar el proceso de sedimentaci�n mediante la centrifugaci�n (13) .

 

T�cnica de sedimentaci�n espont�nea

Es una t�cnica de concentraci�n por sedimentaci�n, en el proceso no se incluye centrifugaci�n, se realiza una mezcla de soluci�n fisiol�gica y materia fecal, es posible detectar huevos y larvas de helmintos, as� como quistes y trofozo�tos de protozoarios, el proceso es lento, sin embargo, en el fondo del recipiente sedimentan de una forma viable y sin deformaci�n (14).

El procedimiento consiste en realizar una mezcla de materia fecal y soluci�n fisiol�gica, se traspasa a un tubo c�nico y se filtra, se procede a homogenizar y dejar en reposo por 45 minutos, trascurrido el tiempo se toma dos al�cuotas, una del centro del tubo y otra del fondo, se agrega en la placa con lugol (14) .

 

T�cnica de Baermann

Es una t�cnica de concentraci�n por migraci�n, consiste en el movimiento de larvas de helmintos y trofozo�tos de protozoos en la misma direcci�n que un est�mulo en espec�fico y su separaci�n de la materia fecal, es decir, se basa en el geotropismo, hidrotropismo y termotropismo. Es utilizado para la obtenci�n de larvas de Strongyloides stercoralis y Balantioides coli principalmente (15) .

En cuanto al procedimiento, se requiere de una copa de vidrio en donde se coloca una rejilla met�lica y sobre la rejilla la muestra de heces, posteriormente por el borde de la copa se vierte soluci�n salina a 37�C, se deja reposar de 30 � 50 minutos, mediante una pipeta se obtiene el sedimente y se observa bajo el microscopio (15) .

 

T�cnica de Ritchie

Es una t�cnica mixta, de sedimentaci�n por centrifugaci�n y flotaci�n, es �til para concentrar quistes, protozoarios y trematodos en materia fecal con un alto contenido de grasa, sin embargo, es poco eficiente en cuanto a la observaci�n de larvas y trofozo�tos. Requiere de compuestos qu�micos como el �ter y formol para separar y obtener las estructuras parasitarias, son compuestos altamente t�xicos por lo cual se modific� la t�cnica y se implementaron insumos qu�micos no t�xicos para el analista (16) .

El procedimiento de la t�cnica de Ritchie modificada consiste en realizar una mezcla de heces con agua, se homogeniza y filtra en un tubo c�nico, adem�s se centrifuga, se decanta el sobrenadante y se a�ade agua tibia y 100 μL de detergente neutro (Tween 20), se repite el proceso hasta obtener un sobrenadante limpio, finalmente se extrae una gota de sedimento y se coloca en una placa con lugol (16) .

 

T�cnica de Kato cualitativo

La t�cnica se basa en la aclaraci�n de las heces con el uso de glicerina que elimina la materia fecal que se encuentra alrededor de los huevos y utiliza coloraci�n de contraste con verde de malaquita, los resultados obtenidos solo indican la ausencia o presencia de los huevos de helmintos; Trichuris trichiura, Ascaris lumbricoides, anquilostoma y principalmente Schistosoma spp., con esta t�cnica no es posible determinar la intensidad parasitaria (17) .

Para realizar el procedimiento se debe preparar una soluci�n con agua destilada, glicerina y verde de malaquita, se introduce papel celof�n en el l�quido y se deja reposar por 24 horas. Transcurrido el tiempo, se coloca una peque�a porci�n de heces en una placa portaobjetos y se cubre con el trozo de papel celof�n, la preparaci�n se coloca bajo la luz durante 10 minutos ya que la glicerina se encarga de clarificar los huevos y finalmente se observa bajo el microscopio (17) .

 

Coproparasitario seriado

Consiste en realizar un examen en fresco o directo al menos tres veces durante la semana, lo cual incrementa las posibilidades de diagn�stico, permite observar las caracter�sticas morfol�gicas de quistes y trofozo�tos de protozoarios, as� como de huevos, larvas y helmintos adultos (16) .

En este caso se utiliza un examen directo para destacar las estructuras internas de los par�sitos, principalmente huevos y quistes mediante el uso de lugol, soluci�n que inmoviliza a trofozo�tos y para su observaci�n se puede utilizar suero fisiol�gico (16).

 

Resultados

 

Tabla 1: Cuadro de resultados con relaci�n a la comparaci�n entre las diferentes t�cnicas diagn�sticas para Geohelmintiasis Intestinal

 

Discusi�n

El enfoque principal de esta investigaci�n fue comprar las diferentes t�cnicas coprol�gicas, sedimentaci�n y flotaci�n para el diagn�stico de Geohelmintiasis intestinal. Se denomina Geohelmintiasis a la infecci�n causada por par�sitos que requieren el contacto con el suelo para poder hospedar al individuo, este tipo de afecci�n es m�s frecuente en zonas subtropicales y pa�ses en v�as de desarrollo (18).

Las infecciones intestinales provocados por par�sitos resultan ser un grave problema para el sistema de salud mundial, ya que, en ciertas zonas geogr�ficas, donde los niveles de sanidad son deplorables, malos h�bitos, poco conocimiento como es el caso de Latinoam�rica, �frica o el sur de Asia, se identifican un gran nivel de parasitosis intestinal. (9) Se estima que dos tercios de poblaci�n infectada son ni�os menores de 12 a�os, donde 4 de cada 10 est�n infectados por geohelmintos como Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Uncinarias siendo estos los m�s frecuentes, adem�s se identifica un porcentaje considerable de infecciones por protozoarios. (19) Por ende, implementar una t�cnica o m�todo para el diagn�stico del agente causal de la infecci�n resulta ser un reto para los laboratorios de baja y media complejidad de estas zonas geogr�ficas. (20)

Las diferentes t�cnicas son �tiles en ciertos tipos de par�sitos a nivel general, por ello, en esta investigaci�n se describe la sensibilidad y especificidad de las t�cnicas de inter�s para un grupo espec�fico de par�sitos y al considerar sus ventajas, desventajas y complejidad del procedimiento se identifica el nivel de positividad diagn�stica de la t�cnica con respecto al par�sito. Siendo imponderable establecer un diagn�stico al momento de usar una de ellas como t�cnica de referencia. (19)

Posterior a la investigaci�n realizada se identifican a los geohelmintos y a los protozoos como los par�sitos de mayor prevalencia, donde Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura son los par�sitos con mayor inter�s debido a su capacidad de infectiva y pat�gena, especialmente en aquellas �reas donde las estructuras sanitarias y la tecnolog�a m�dica son deficientes o inexistentes. (19)

Dentro de las t�cnicas, cuyo fundamento es la sedimentaci�n encontramos dos procedimientos �tiles para identificar geohelmintos y protozoos. La t�cnica de Ritchie resulta ser �til cuando enfrentamos infecciones por protozoos, ya que su sensibilidad es del 90% y en donde no es necesario el uso de equipos sofisticados o costosos, por ende, de f�cil implementaci�n para la mayor parte de los laboratorios. Mientras que, la t�cnica de Kato cualitativo es de mayor uso en la identificaci�n de helmintos y sus variantes biol�gicas como larvas y/o huevos, ya que sus porcentajes de sensibilidad y especificidad punt�an el 95%. (19)

Por otra parte, encontramos a las de flotaci�n, donde el elemento de inter�s se obtiene en un medio libre de impurezas lo que facilita la observaci�n de la placa de lectura. En este grupo encontramos a la t�cnica de Faust considerada como la �til al momento de observar protozoos, quistes y huevos de helmintos y otras t�cnicas como Sheather o Willis no poseen gran capacidad diagn�stica de geohelmintos, siendo su principal desventaja. Por otro lado, el coproparasitario seriado a pesar de tener una gran sensibilidad y especificidad para el diagn�stico de parasitosis no es completamente �nica para Geohelmintiasis ya que se puede observar protozoos, quistes, huevos y larvas de helmintos (20)

El uso de alguna t�cnica o m�todo para el diagn�stico de infecciones o enfermedades deben ajustarse a la capacidad del laboratorio y sobre todo a las necesidades del entorno y la sociedad.(20)

 

Conclusiones

Respecto al estudio realizado y a la informaci�n recolectada, se analiz� que las mejores t�cnicas para identificar Geohelmintiasis Intestinal es la t�cnica Kato cualitativo con una sensibilidad y especificidad del 95% y Baermann con el 97% para identificar Strongyloides stercoralis, sin embargo, implementar diferentes t�cnicas coprol�gicas ayudan al diagn�stico oportuno ya que aumentan la especificad y sensibilidad.

Conocer sobre las diferentes t�cnicas ayudan a una mejor observaci�n parasitaria, ya que cada t�cnica posee reactivos o procedimientos que ayudan a determinar y preservar las estructuras parasitarias.

Los art�culos indagados presentan la correlaci�n que existe entre el tipo de parasitosis y el agente causal, por ello es importante saber las t�cnicas de acuerdo a la patolog�a, en este caso para Geohelmintiasis Intestinal.

 

Referencias

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